细胞转染

使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行质粒转染

①接种细胞：根据实验具体情况，准备适宜浓度的细胞接种至12孔板，转染时细胞接合度约70%-80%为宜；

②细胞准备：弃原培养基，使用PBS洗1次（去除SP干扰），换为10%FBS，无SP，高糖DMEM培养基，350uL/孔，放回细胞培养箱孵育；

③制备转染复合体；使用OPTI-MEM培养基稀释Lipo3000，12孔板每孔所用试剂量为75uL OPTI-MEM+2uL Lipo 3000；用OPTI-MEM培养基稀释DNA和P3000试剂，12孔板每孔所用试剂量为75uL OPTI-MEM+2uL P3000/ug DNA +2500ng DNA，稀释后将两种试剂轻轻震荡混匀，室温孵育10-15分钟；

④细胞转染：将上述转染复合物缓慢滴入细胞培养板中，12孔板转染体系总体积为500uL，8-12小时换液，更换为正常含FBS培养基，24-48小时可检测转染效率及进行下一步实验。