transwell及划痕实验
简介：细胞迁移是细胞在接受某些信号或感受某些物质浓度梯度后移动。Transwell小室通过一层聚酯薄膜（PET）将培养板的孔板体系分为上下两室，借以研究下室的培养体系对上室细胞迁移运动的影响，可用于共培养/细胞趋化与侵袭等实验研究。
原理：选用不同孔径的Transwell小室能够实现对细胞不同的培养效果，小于3μm的孔径细胞无法通过，可用于共培养研究，通常选用5μm以上孔径用于研究涉及迁徙相关实验。
实验材料准备：Transwell培养板、细胞、完全培养基及无血清培养基、刺激因子
实验步骤：（以Transwell研究刺激因素对细胞迁移功能影响为例）
- 在24孔板中加入完全培养基600μl，以及对照及刺激
- 将小室轻轻放入24孔板中，小室薄膜与液体间避免形成气泡
- 将消化-离心-重悬后的细胞200ul（细胞总量2~3*10^4）加入上室，缓慢加入，尽量保证细胞分布均匀
- 加入后，将培养板于超净台中静置30min，然后将培养板转移至细胞培养箱中。
- 24h后，取出小室，浸入PBS中洗去培养基，4%多聚甲醛固定15min，1x结晶紫染色8min
- 取出小室，浸入PBS中洗去浮色，用沾湿的棉签轻轻擦拭Transwell小室内壁以拭去未穿越至外壁的细胞，待小室干燥后即可于显微镜下拍照。
实验观察：
划痕实验
简介：通常用于测定细胞迁移运动，在体外培养平板的单层贴壁细胞上，通过观察周边细胞的划痕变化，评测细胞的生长迁移能力。
实验材料准备：直尺、PBS
实验步骤：
- 将细胞种入6孔或12孔板中，待细胞密度达到90%以上
- 利用直尺比对，使用枪头在培养板上轻轻划出一条直线
- PBS清洗两次，清除划下的细胞
- 在不同孔间使用不同刺激或对照，在12h或24h后观察划痕恢复情况。
